很多科研小伙伴在細胞培養的過(guò)程中，總是出現各種各樣的情況和問(wèn)題，比如，細胞漏液、不貼壁、細胞有黑點(diǎn)、支原體污染、不增殖、細胞老化變形、復蘇存活率低等等，這些問(wèn)題對于參與細胞實(shí)驗的小伙伴來(lái)說(shuō)，是急需解決的大問(wèn)題，好不容易買(mǎi)來(lái)的細胞，剛剛進(jìn)行培養傳代，就出現了以上的各種問(wèn)題，這樣的情況通常都會(huì )令小伙伴們無(wú)比抓狂。

因為想要開(kāi)展后續實(shí)驗，培養細胞往往是關(guān)鍵要事，細胞養不好，后續實(shí)驗就無(wú)法進(jìn)行。

如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、復蘇存活率低等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那么還有一種情況發(fā)生，那就是你的細胞可能被污染了。所以不管發(fā)生哪種類(lèi)型的污染情況都會(huì )造成相同的結果，就是實(shí)驗需要重新做，這樣不僅增加了實(shí)驗成本，而且又浪費工作時(shí)間，還增加了實(shí)驗的重復性。

而且以污染細胞和未污染細胞為基礎進(jìn)行實(shí)驗時(shí)，有可能得到的實(shí)驗結果*不同。更為嚴重的是，如果你所研究的細胞是另外一種細胞的話(huà)，那所做的所有工作可能會(huì )一文不值。

那么為什么一定要進(jìn)行支原體污染清除呢？

支原體污染清除要求

從2013年開(kāi)始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進(jìn)行支原體檢測。以細胞為載體的科學(xué)研究，如果不能保證所用的細胞無(wú)支原體污染，則實(shí)驗結果很可能是不可靠甚至是*錯誤的！

支原體直徑約為0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無(wú)效。支原體污染是細胞培養領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。

支原體可通過(guò)細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

電鏡下的支原體

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，一般不會(huì )引起培養物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。支原體會(huì )消耗必須氨基酸，影響細胞生長(cháng)速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。

支原體的危害

支原體清除服務(wù)包括以下幾個(gè)方面：

服務(wù)對象

1. 實(shí)驗室的種子細胞，如從ATCC、JCRB、DMSZ等國外專(zhuān)業(yè)細胞庫采購的珍貴細胞系；

2. 組織珍貴的原代細胞；

3. 需要進(jìn)行基因編輯的細胞；

4. 各類(lèi)干細胞（含iPS細胞）；

5. 稀有細胞。

服務(wù)內容

1.根據客戶(hù)提供的細胞名稱(chēng)、細胞代次、細胞類(lèi)型制定細胞的支原體清除方案；

2. 細胞STR鑒定（選做）；

3. 支原體PCR法檢測支原體污染程度；

4. 細胞的支原體清除，一般污染單一支原體的清除時(shí)間為2周左右，感染多種支原體且非常嚴重的細胞，清除時(shí)間需要延長(cháng)，約3-4左右；

5. 2-3周后，再次進(jìn)行支原體檢測，如果細胞支原體清除干凈，將換為支原體預防培養方案，繼續維持一周左右時(shí)間。如未清除干凈，則適當延長(cháng)1-2周繼續清除頑固支原體，2周后再次進(jìn)行復檢。

服務(wù)周期與價(jià)格

送樣要求

1. 復蘇細胞（充液運輸）：生長(cháng)狀態(tài)良好的細胞，待達70%-80%匯合時(shí)，去掉舊培養液換入新培養液，量要達到培養瓶的頸部（過(guò)滿(mǎn)易污染），保留少許空間，旋緊瓶蓋，避免空氣過(guò)多運輸中氣泡運動(dòng)易使細胞脫落。

2. 凍存細胞（干冰運輸）：將干冰提前置于塑料泡沫盒中，以較快的速度將細胞凍存管從液氮轉入干冰中，用膠帶封好泡沫盒，在外面加套一層紙盒，延緩干冰揮發(fā)。

注：根據距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm，內部空間不小于200× 200× 200mm，放入足量干冰。

支原體清除案例

如上圖1所示，左側為支原體污染的MCF-7細胞，右側為支原體清除后的MCF-7細胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細胞間隙間黑點(diǎn)明顯減少，細胞邊緣清晰，狀態(tài)良好。

如上圖2所示，左側為支原體污染的Hep G2細胞，右側為支原體清除試劑處理的Hep G2細胞。左側有支原體污染的細胞樣品可以觀(guān)察到細胞核周?chē)⒘罨蚪z狀藍色熒光。支原體污染嚴重的細胞可以觀(guān)察到大量微粒狀或絲狀藍色熒光。右側細胞支原體污染被清除干凈，僅觀(guān)察到細胞核的藍色熒光，證明支原體已被清除干凈。

注意事項

1. 由于各個(gè)實(shí)驗室細胞培養體系不同，且更換體系細胞會(huì )需要一段時(shí)間的適應，故本服務(wù)需客戶(hù)自行提供足量的培養體系；

2. 根據客戶(hù)需求，STR鑒定服務(wù)為選做項目，鏡像綺點(diǎn)生物承諾對于支原體清除服務(wù)細胞進(jìn)行單獨隔離培養，客戶(hù)為保證實(shí)驗嚴謹性，可選擇我司進(jìn)行STR鑒定服務(wù)；

3. 由于細胞隨時(shí)可能會(huì )存在交叉的風(fēng)險，只認可我司接收細胞后第yi時(shí)間進(jìn)行的STR鑒定結果；

提供結果

原始支原體PCR結果圖片和無(wú)支原體污染的細胞（根據客戶(hù)需要選擇充復蘇/凍存發(fā)貨形式）。

保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶(hù)提供產(chǎn)品的檢測信息與數據，履行保密義務(wù)，未經(jīng)客戶(hù)許可，不得擅自公開(kāi)發(fā)表或使用，不得泄露給第三方。

支原體清除試劑

另外，鏡像綺點(diǎn)還提供可有效抑制并清除多種支原體的支原體清除劑，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗驗證對細胞幾乎沒(méi)有毒性，對細胞的各種檢測沒(méi)有干擾。通常在細胞培養液中加入本試劑約1至2周即可有效抑制和清除支原體。

iCell支原體清除劑為透明淡黃色液體。具體的工作濃度因支原體的種類(lèi)不同而有所不同，在實(shí)際防止支原體污染或清除支原體污染時(shí)需摸索適當的工作濃度。

支原體清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細胞的測試和長(cháng)期的實(shí)驗驗證，對細胞無(wú)害，對清除支原體污染*，能夠很好的抑制和殺滅支原體。

所以，科研小伙伴們如果你們手里珍貴的細胞被支原體污染了，沒(méi)有辦法做實(shí)驗，沒(méi)有其他地方采購，千萬(wàn)不要扔掉，交給我們，相信我們，我們會(huì )還你一個(gè)狀態(tài)好又無(wú)污染的好細胞，而且我們保證，不成功不收費的哦~~~