培養小鼠小膠質(zhì)BV2細胞需要遵循一系列特定的步驟和注意事項，以確保細胞的健康生長(cháng)和實(shí)驗的準確性。以下是培養BV2細胞的一般步驟：

　　

　　一、準備階段

　　

　　1、培養基準備：使用DMEM高糖培養基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-鏈霉素（P/S）。

　　

　　2、環(huán)境控制：確保培養箱內的空氣占95%，二氧化碳濃度為5%，溫度保持在37℃。

　　

　　二、復蘇階段

　　

　　1、提前將水浴鍋預熱至37℃，培養基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速。

　　

　　2、從液氮罐中取出細胞，迅速搖晃直至融化至米粒大小冰塊時(shí)終止水浴，整個(gè)過(guò)程不超過(guò)2分鐘。

　　

　　3、直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2分鐘，棄上清，用預熱的培養基緩慢加入凍存管，輕柔重懸細胞后接種至培養瓶中。

　　

　　三、傳代階段

　　

　　1、輕輕吸走培養上清，留2-3mL培養基輕輕吹打細胞面吹下細胞。

　　

　　2、將細胞懸液轉移至離心管，900rpm離心3-5分鐘，棄上清。

　　

　　3、加新的全培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里，補足全培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養。

　　

　　四、凍存階段

　　

　　1、配制程序性?xún)龃嬉?，推薦配方為92%FBS+8%DMSO或92%全培養基+8%DMSO。

　　

　　2、先將細胞按傳代步驟獲得細胞沉淀，加入適量程序性?xún)龃嬉狠p輕重懸細胞，并將細胞懸液轉移至凍存管中。

　　

　　3、將凍存管放入程序性?xún)龃婧?，放?80℃冰箱過(guò)夜，然后轉移至液氮保存并登記細胞保存位置。

　　

　　總之，培養小鼠小膠質(zhì)BV2細胞需要嚴格控制培養條件、及時(shí)處理細胞狀態(tài)變化，并遵循規范的操作流程。通過(guò)這些措施，可以確保BV2細胞的健康生長(cháng)和實(shí)驗的順利進(jìn)行。