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小鼠的海馬神經(jīng)元細胞HT22培養操作規程
更新時(shí)間：2023-06-16 瀏覽次數：1678
小鼠的海馬神經(jīng)元細胞HT22培養操作規程，供參考：
一、小鼠海馬神經(jīng)元細胞(HT22)培養基及培養凍存條件準備：
1、準備DMEM培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2、培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
三、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
?。?）棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
?。?）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入2ml此細胞的全培養基終止消化。
?。?）輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
?。?）移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
3、小鼠的海馬神經(jīng)元細胞HT22細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
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