TF-1 人紅白血病細胞/STR鑒定介紹

該細胞系1987年由Kitamura T等建立，源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本，該患者具有嚴重的全血細胞減少癥。細胞生長(cháng)*依賴(lài)于IL-3或GM-CSF，對IL-5無(wú)反應。多種淋巴因子和細胞因子對該細胞都有作用，如：IL-1、IL-4、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、CSF、LIF、NGF。該細胞不表達血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由該細胞的形態(tài)和細胞化學(xué)特征及珠蛋白基因的組成性表達，顯示該細胞屬于紅系。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導細胞合成血紅蛋白，TPA刺激細胞向巨噬細胞樣細胞分化。

細胞特性

1） 來(lái)源：白血病細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長(cháng)，生長(cháng)過(guò)程中會(huì )有細胞附在培養瓶壁上

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

TF-1 人紅白血病細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1) 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%，添加2 ng/ml GM-CSF；雙抗，1%。該細胞懸浮生長(cháng)，生長(cháng)過(guò)程中會(huì )有細胞附在培養瓶壁上的現象。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：傳代低密度不少于2xE4/ml；細胞密度保持在3xE4—5xE5/ml；生長(cháng)密度zui高不超過(guò)7xE5/ml。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3） 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。懸浮細胞凍存時(shí)，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

下面T25瓶為例；

1，細胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細胞服務(wù)
       各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
       原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等；
       原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗外包服務(wù)；

二、細胞株/系服務(wù)
       細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)；
       細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導；
       細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等；

三、iPS細胞
       iPS細胞基礎培養（有滋養層or無(wú)滋養層在）；
       iPS細胞增殖及冷凍保存；
       iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習；
       新藥及實(shí)驗儀器上市前評估；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類(lèi)細胞生物學(xué)實(shí)驗、分子生物學(xué)實(shí)驗、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據客戶(hù)需要定制服務(wù)等

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